POURQUOI AUTOMATISER L’IFI POUR LE DIAGNOSTIC DES MALADIES AUTOIMMUNES
La confirmation de symptômes évoquant une maladie rhumatismale est principalement réalisée par l’évaluation/la détection sérologique d’auto-anticorps spécifique de la maladie (par ex. la recherche d’anticorps anti-nucléaires, ANA).
Malgré l’essor de techniques immuno-enzymatiques comme l’ELISA et d’autres méthodes, le dépistage des ANA par IFI demeure actuellement la technique de référence pour le diagnostic des maladies rhumatismales systémiques comme : le lupus érythémateux (LES), le syndrome de Sjögren (SS), la sclérose systémique progressive (SSP), la dermatomyosite-polymyosite (DM/PM) ou la connectivite mixte (MTCM).
Les directives internationales recommandent de réaliser le dépistage des ANA sur la lignée cellulaire épithéliale humaine HEp-2. D’autres substrats cellulaires comme le protozoaire Crithidia luciliae (pour la détection des auto-anticorps anti-ADNdb) et les granulocytes humains (pour la détection des auto-anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires neutrophiles, ANCA) sont régulièrement employés dans les procédures d’IFI sur cellules.
Les auto-anticorps produisent des aspects de fluorescence caractéristiques dont l’analyse dépend de la connaissance et de l’interprétation subjective des experts de laboratoire, et la grande variabilité intra- et inter-laboratoires qui en découle représente un problème majeur pour le diagnostic des maladies auto-immunes.
L’accroissement de la charge de travail et la nécessité d’une évaluation standardisée et reproductible des tests d’IFI sur substrat cellulaire ont encouragé les laboratoires d’auto-immunité à s’orienter vers l’automatisation.
Le nouveau système Zenit G Sight d’ A. Menarini Diagnostics a été spécifiquement conçu pour surmonter les problèmes spécifiques de l’IFI rendant la technique particulièrement adaptée au diagnostic sérologique automatisé des maladies auto-immunes en routine de laboratoire.
PROCEDURE IFI
Les principales étapes de la méthode sont:
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1
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Dilution du sérum (par exemple 1:80) et incubation avec le substrat fixé sur les lames pendant 30 min dans une chambre humide à température ambiante.
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2
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Incubation avec le conjugué (anticorps de chèvre anti-Ig humaines marqué au FITC, isothiocyanate de fluorescéine) à température ambiante pendant 30min.
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3
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Evaluation: analyse visuelle ou automatisée des lames.
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ASPECTS DE LA FLUORESCENCE*
La détection des ANA effectuée sur cellules HEp-2 génère des aspects de fluorescence spécifiques.
Les cinq aspects principaux décrits sont les suivants :
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Homogène/Périphérique
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Nucléolaire
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Moucheté
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Centromère
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Cytoplasmique/ Mitochondrial
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* Les aspects de fluorescence ANA sont représentés car le test ANA Hep-2 constitue le dosage le plus utilisé pour le dépistage visuel/automatique des maladies rhumatismales